ข้อ ๕ การฆ่าสัตว์ในโรงฆ่าสัตว์ ผู้รับใบอนุญาตต้องปฏิบัติตามหลักเกณฑ์ ดังต่อไปนี้
(๑) งดให้อาหารสัตว์ และจัดให้มีการพักสัตว์ภายในระยะเวลาที่เหมาะสมก่อนทำการฆ่า
(๒) ต้องมีขั้นตอนทำให้สัตว์สลบด้วยกระแสไฟฟ้า ปืนทำสลบ (Captive bolt pistol) หรือก๊าซก่อนทำการฆ่า โดยเลือกใช้ให้เหมาะสมกับชนิดของสัตว์ตามคำแนะนำของพนักงานเจ้าหน้าที่ เลม่ ๑๓๘ ตอนที่ ๗๘ ก หนา้ ๑๐ ราชกิจจานุเบกษา ๒๕ พฤศจิกายน ๒๕๖๔ ยกเว้นการฆ่าสัตว์ตามพิธีกรรมหรือข้อบัญญัติทางศาสนาสามารถใช้วิธีบังคับสัตว์ให้สงบด้วยกรวยหรือ ซองบังคับสัตว์เพื่อไม่ให้สัตว์ทรมานโดยไม่ต้องทำสลบซึ่งเป็นวิธีที่พนักงานเจ้าหน้าที่เห็นว่าเหมาะสมและ เป็นที่ยอมรับกันทั่วไปในการบังคับสัตว์
(๓) การนำเลือดออกจากสัตว์ ต้องปล่อยให้เลือดออกอย่างสมบูรณ์โดยสัตว์ต้องตายก่อน ลอกหนังหรือลวกถอนและปั่นขน ในกรณีที่เลือดนั้นใช้สำหรับการบริโภค ต้องใช้ภาชนะสะอาดรองรับ
(๔) หลังกระบวนการฆ่าสัตว์แล้วซากสัตว์ต้องไม่สัมผัสพื้นและผนัง โดยส่วนล่างสุดของซาก ต้องอยู่สูงจากพื้นไม่น้อยกว่า ๓๐ เซนติเมตร
(๕) ต้องจัดให้มีห้องแยกสำหรับล้างทำความสะอาดเครื่องในสัตว์ โดยเครื่องในแดงให้ล้าง ในห้องแยกของพื้นที่ส่วนที่สะอาด ส่วนเครื่องในขาวให้ล้างในห้องแยกของพื้นที่ส่วนที่ไม่สะอาด ยกเว้น โรงฆ่าไก่ เป็ด ห่าน และสัตว์ปีกอื่นที่มีการประกาศเพิ่มเติมโดยกฎกระทรวงว่าด้วยการกำหนดชนิด ของสัตว์ที่ออกตามมาตรา ๑๔
(๑) ให้มีห้องแยกโดยไม่ต้องแบ่งตามพื้นที่ ทั้งนี้ ในการล้างทำความสะอาด เครื่องในสัตว์ต้องไม่ทำให้เครื่องในสัตว์สัมผัสพื้น และน้ำเสียจากการล้างต้องต่อลงสู่ระบบระบายน้า โดยตรง